根據細胞培養時是否附著在支持介質上，分為貼壁細胞和懸浮細胞。

貼壁細胞(bao)天生容易(yi)貼壁，這(zhe)為后續實驗(yan)提供了便(bian)利條件。

但是懸浮細胞在培養基中懸浮生長，如何像貼壁細胞一樣好操作，一直是大家的夢想。

一 傳統的方法：細胞準備與固定

（1）單層生長細(xi)胞：取對數生長細(xi)胞，用0.25％胰蛋白酶消化(hua)，制成單細(xi)胞懸(xuan)液。將細(xi)胞接種到預先放(fang)置幾張6×22mm蓋玻片的培養瓶或培養(yang)(yang)皿中，置二氧(yang)化(hua)碳培養(yang)(yang)箱培養(yang)(yang)1-3天，待細(xi)胞(bao)接近長成(cheng)單層，取出蓋玻(bo)片，進入(ru)PBS（0.01 mol/L,pH7.4）洗2次，然后根據實驗目的，選擇適當固(gu)(gu)定劑固(gu)(gu)定細(xi)胞(bao)。常用固(gu)(gu)定劑有：95％乙醇（固(gu)(gu)定時間10-30min），丙酮(tong)（5－10min）等。

（2) 懸浮(fu)生長細胞(bao)(bao)：取(qu)對(dui)數生長細胞(bao)(bao)，用PBS離心洗滌（1000rpm，5min）2次，或用細胞(bao)(bao)離心甩片機制(zhi)備細胞(bao)(bao)片或直接制(zhi)備細胞(bao)(bao)涂(tu)片，把細胞(bao)(bao)片浸(jin)入95％乙(yi)醇或丙酮中固定(ding)。

2 將已(yi)經固定(ding)的細胞玻片放(fang)入(ru)蓋片染色(se)缸，用PBS振洗5min，取出(chu)吹干。

3 滴加適當(dang)稀釋(shi)的特異性(xing)抗體，置(zhi)于濕盒內，37度(du)(du)保溫30－60min或度(du)(du)冰(bing)箱過夜

4 PBS振洗(xi)3次(ci)，每次(ci)5min，吹干。

5 滴加適當稀釋的(de)熒(ying)光素(su)標記抗體(ti)，置(zhi)于濕(shi)盒內，37度保溫30－60min。

6 PBS振洗2次，每次5min，然后(hou)用蒸餾(liu)水振洗1次。

7 50％緩沖甘油封片。

二 Shi-Fix玻片最新(xin)方(fang)法

Shi-Fix玻片，可以讓(rang)我(wo)們(men)像貼壁(bi)細胞(bao)一樣(yang)對懸浮(fu)細胞(bao)做(zuo)(zuo)免疫熒光，如(ru)下是使(shi)用(yong)Shi-Fix做(zuo)(zuo)的實驗結(jie)果。簡單的四部，告別傳(chuan)統的自(zi)己(ji)涂片，自(zi)己(ji)甩片，自(zi)己(ji)烤片等作坊式方法。