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懸浮細胞做好免疫熒光的關鍵步驟

更新時間:2023-02-17   點擊次數:2248次

您(nin)是否希望(wang)懸浮細胞的免疫熒(ying)光像貼壁細胞一樣容易?現在就是這(zhe)樣!

靶點科技Shi-fix玻(bo)片(pian)允許懸(xuan)浮細胞(bao)(bao)分層或直接作為(wei)單(dan)層生(sheng)長。簡單(dan),無(wu)憂的(de)實驗方案,無(wu)需(xu)離心即可將懸(xuan)浮細胞(bao)(bao)固定到(dao)載(zai)玻(bo)片(pian)上。只需(xu)將細胞(bao)(bao)添加(jia)到(dao)載(zai)玻(bo)片(pian)上,等待30分鐘,用PBS洗滌未結合的(de)細胞(bao)(bao)并繼(ji)續免疫染(ran)色(或繼(ji)續培養以獲(huo)得所需(xu)的(de)細胞(bao)(bao)密度)。

這些玻(bo)(bo)片也可用于染色懸浮細(xi)(xi)胞以(yi)進(jin)行顯微(wei)鏡(jing)檢查(cha),或用于固定(ding)懸浮細(xi)(xi)胞以(yi)進(jin)行共聚焦顯微(wei)鏡(jing)檢查(cha)。更重要(yao)的是,如果需要(yao),您還(huan)可以(yi)在(zai)細(xi)(xi)胞附著在(zai)玻(bo)(bo)片上時刺激(ji)它們。您可以(yi)像貼壁(bi)細(xi)(xi)胞一樣處(chu)理(li)非(fei)貼壁(bi)細(xi)(xi)胞!

關鍵步驟:

1. 使用(yong)PBS清洗細胞,并(bing)將細胞重新懸浮于PBS中(2-5 百(bai)萬個(ge)/ml)

2. 把懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)專(zhuan)用(yong)免疫熒(ying)光玻(bo)(bo)片(pian)放置于(yu)12孔(kong)或者6孔(kong)細(xi)胞(bao)培養板孔(kong)里,直接滴加(jia)細(xi)胞(bao)于(yu)懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)專(zhuan)用(yong)免疫熒(ying)光玻(bo)(bo)片(pian)上(每個(ge)玻(bo)(bo)片(pian)上20-30萬個(ge)細(xi)胞(bao))

3. 使細(xi)胞(bao)附著30分鐘,有些細(xi)胞(bao)需要(yao)延長附著時(shi)間,但不要(yao)超過1小時(shi)。使用(yong)約2ml PBS沖洗掉未結合細(xi)胞(bao)(切勿直(zhi)接垂直(zhi)滴(di)(di)加(jia)PBS到玻片上(shang)細(xi)胞(bao),可(ke)將PBS滴(di)(di)加(jia)于板孔里側(ce)邊(bian),然后輕(qing)輕(qing)搖晃3-5分鐘)

4. 在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下檢查細胞附(fu)著情況,如果需要進一步培(pei)(pei)養(yang)(yang),那么加入1ml培(pei)(pei)養(yang)(yang)基即可(ke);若不培(pei)(pei)養(yang)(yang)即可(ke)直(zhi)接固定,染色(se)。


四(si)步走(zou),操作示意圖如下:





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