細(xi)胞(bao)培養(yang)類(lei)型可以分為(wei)貼壁細(xi)胞(bao)和懸浮細(xi)胞(bao)兩種(zhong)，只有極少數類(lei)型細(xi)胞(bao)同時存在兩種(zhong)狀態。
懸浮(fu)(fu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)是指不需要(yao)依賴(lai)支(zhi)持物(wu)，可在培養(yang)(yang)基(ji)中以懸浮(fu)(fu)狀(zhuang)態生(sheng)長的(de)(de)一類細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，如(ru)淋巴細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)和(he)大部分血液系統來(lai)源(yuan)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)。（如(ru)小(xiao)鼠白血病細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)WEHI-3, 人(ren)白血病細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)K-562, HL-60）。工(gong)業上也有越(yue)來(lai)越(yue)多的(de)(de)貼壁傳(chuan)(chuan)代細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)被馴(xun)化出(chu)來(lai)，進行(xing)全懸浮(fu)(fu)的(de)(de)培養(yang)(yang)。目前在工(gong)業中應用(yong)的(de)(de)主要(yao)有SP2/0、NS0、CHO、BHK和(he)HEK293細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)等(deng)(deng)，它們(men)主要(yao)用(yong)于重組蛋白質生(sheng)產；在獸(shou)用(yong)生(sheng)物(wu)制品中常用(yong)的(de)(de)傳(chuan)(chuan)代細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)主要(yao)有采用(yong)全懸浮(fu)(fu)培養(yang)(yang)的(de)(de)BHK21細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、MDCK細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)；及借(jie)助微載(zai)體懸浮(fu)(fu)培養(yang)(yang)的(de)(de)Vero細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、PK細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、ST細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、 Marc145細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)等(deng)(deng)，每種細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)特性都不同。
一般情況下，懸(xuan)浮(fu)(fu)細胞(bao)(bao)相較于貼(tie)(tie)壁(bi)細胞(bao)(bao)的處(chu)理更(geng)加(jia)簡單(dan)一些，因為懸(xuan)浮(fu)(fu)細胞(bao)(bao)傳(chuan)(chuan)代時無須胰酶(mei)消(xiao)化(hua)。但(dan)這并不意味著懸(xuan)浮(fu)(fu)細胞(bao)(bao)比貼(tie)(tie)壁(bi)細胞(bao)(bao)好養，對新手來說(shuo)(shuo)，反而(er)更(geng)具挑戰性。總是會遇到各(ge)種(zhong)各(ge)樣的問題：比如，為什么總是出(chu)現死細胞(bao)(bao)和細胞(bao)(bao)分化(hua)；說(shuo)(shuo)好了(le)傳(chuan)(chuan)代很(hen)easy的，結果會出(chu)現分化(hua)；養好了(le)凍存(cun)復(fu)蘇后又出(chu)現問題了(le)！
養(yang)好(hao)懸浮(fu)細胞，有(you)如下大眾經驗分享。
要點一：足夠的耐心，這是非常必要的
很(hen)多懸浮細(xi)(xi)胞在(zai)剛從(cong)(cong)凍存(cun)狀態復蘇時(shi)(shi)活力(li)是(shi)相對較差的，此時(shi)(shi)我們需(xu)要(yao)有足夠(gou)的耐心(xin)，等待細(xi)(xi)胞完成自我修復進入對數增(zeng)長期(qi)。比如(ru)THP-1（人單核細(xi)(xi)胞白血病）從(cong)(cong)解凍到(dao)恢復正常增(zeng)殖往(wang)往(wang)需(xu)要(yao)7-10天的恢復期(qi)；Jurkat，Clone E6-1(人T淋巴細(xi)(xi)胞白血病細(xi)(xi)胞)復蘇后也需(xu)要(yao)5-7天才能恢復到(dao)凍存(cun)前的狀態。新(xin)手可能會在(zai)此期(qi)間放棄培養(yang)，所以(yi)，請多一(yi)點耐心(xin)哦！培養(yang)這(zhe)類細(xi)(xi)胞也是(shi)培養(yang)耐心(xin)的過程呢(ni)！
要點二：接種密度的把握
一般來說，懸(xuan)浮(fu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)接種(zhong)時(shi)密度(du)不應低于50萬(wan)個/ML，很(hen)多懸(xuan)浮(fu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)有(you)密度(du)依賴(lai)，密度(du)低導致的不增殖(zhi)也是(shi)新手(shou)常(chang)見問題之一。當(dang)然，有(you)極少數細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)在密度(du)高時(shi)反而狀態變差，如W6/32（小鼠(shu)B細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)雜交瘤細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)）。因此，培養(yang)不了(le)解的細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)前查找相關資料去掌握細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)特性非(fei)常(chang)重要。
要點三：換液方法及頻率
換(huan)液(ye)頻(pin)率不應該被限(xian)制得“明明白白"，細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)是活物(wu)，在一個(ge)連續培養(yang)周期內，視細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)長狀態(tai)可分多次添加補充培養(yang)基(ji)、葡萄糖等(deng)特定營養(yang)成份，維持細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)良好的生(sheng)長狀態(tai)。懸浮培養(yang)過程中，隨(sui)著細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的增殖，原有(you)培養(yang)基(ji)中營養(yang)物(wu)質(zhi)(zhi)的消耗，代謝產物(wu)的增加，細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的活率會下降，及時補充營養(yang)物(wu)質(zhi)(zhi)，使(shi)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)處于一個(ge)相(xiang)對(dui)良好的生(sheng)存環境。切忌頻(pin)繁離心換(huan)液(ye)。參(can)考換(huan)液(ye)方法：
①離心(xin)全換液法(fa)
即通過離(li)心（800-1000rpm，5min）去除全部舊的培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基，更(geng)換新鮮培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基。該方法適(shi)合(he)“皮(pi)實“好(hao)(hao)養(yang)(yang)的懸浮細(xi)胞(bao)換液(如K562)，或者當前細(xi)胞(bao)狀態(tai)良好(hao)(hao)、密(mi)度較高(gao)導致培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基消耗較大的情(qing)況。此方法的優點(dian)是換液到位(wei)，能(neng)去除部分細(xi)胞(bao)碎(sui)片(pian)，但是同樣會對(dui)細(xi)胞(bao)造成一定程度的機(ji)械(xie)損(sun)傷(shang)。
②離心(xin)半換(huan)液(ye)法
即通過(guo)離(li)心（800-1000rpm，5min）50%細胞懸液，更換50%體積(ji)的(de)新(xin)鮮培(pei)養(yang)基。該方法適合比較(jiao)“矯情“難養(yang)的(de)細胞（如thp-1），或者正在(zai)調整狀態(tai)中(zhong)、密度較(jiao)低但(dan)碎片較(jiao)多需要去除的(de)情況。
③沉降換液(ye)法
即(ji)不使用離(li)(li)(li)心(xin)機(ji)而是利用重力自(zi)然沉降的方法(fa)，將培養(yang)基與(yu)細(xi)胞(bao)分離(li)(li)(li)，達到全部或部分更換新鮮培養(yang)基。但是其有應用局限性(xing)—只適合能成一定(ding)大小細(xi)胞(bao)團（否則無法(fa)自(zi)然沉降，只能低速離(li)(li)(li)心(xin)）的細(xi)胞(bao)，尤(you)其是處(chu)理依賴(lai)細(xi)胞(bao)聚集才(cai)能增殖的細(xi)胞(bao)時非常(chang)值得推薦，如NK-92、NK-92 MI、Jurkat。該(gai)方法(fa)能在換液過(guo)程中最大限度避免離(li)(li)(li)心(xin)過(guo)程造(zao)成的機(ji)械損傷，同時保留聚集的細(xi)胞(bao)團，并(bing)且去(qu)除細(xi)胞(bao)碎(sui)片也較為干凈。
固定懸浮細胞，有如下私房經驗分享。
養好懸浮細胞，需要用化合物等試劑刺激懸浮細胞，或者共培養。使用免疫熒光來檢查懸浮細胞，一直給很多新手，甚至高手造成心理陰影。如何固定好懸浮細胞？如何確保不掉片？甚至如何讓懸浮細胞貼壁來做實驗？是很多實驗者的奢望。懸浮細胞固定/免疫熒光專用玻片給帶來解決方案。
如下(xia)是一些懸浮細胞固定后做的免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)圖片，可以(yi)參考。
